荧光成像为吸附症提供新光
每一秒,我们身体中约一百万细胞被吸附症摧毁并代之以新细胞切片自杀过程对维护细胞自闭和身体健康至关紧要,并在胚胎条件、生理条件和病理条件中发挥重要作用。细胞在病态条件中绕过吸附症,基本活过日期,并可能因染色变换而致肿瘤或癌症化在这些例子中,chemapies和抗癌症药被用于诱发potiscois,防止肿瘤进一步扩散,以治病为目的。apotosis处理抗癌药后,为了确保这些药正常工作, 研究人员和保健从业者能够准确识别并量化非pototice目前有几种方法,但多数需要昂贵和精密设备与程序,如低温显微镜、高分辨率显微镜或专用卷缩显微镜此外,这些方法使用处理细胞样本,而不是活化机体,无法显示药物机制在标准实验室搭建中实时逐例诱导过程的行动机制
Nandini Dey博士、Pradip De博士和Jennifer Carlson Aske女士,南达科他州Avera癌症学院研究组历时多年研究抗癌症药及其作用模式具体地说,他们的兴趣在于肿瘤细胞行为响应处理,而aptocisi由该组确定的方法显示事件识别活细胞中poticosis现象,使这些细胞能够监控非poticotic细胞后进行抗癌药物处理,包括传统化疗药、定向治疗药和细胞内免治药
Avera癌症研究所团队设计出一种成本效益高和方便用户的方法,实时可视化活细胞分解后物理和生化过程最近发表在科学报告上,团队显示,这一独特工具可确定抗癌症药物的功效,并有可能识别新药目标。新方法新颖性在于它以方便实验室方式识别三种相继基本生化、酶和形态事件
apotosis
遇上危机时,你愿意牺牲一个来拯救更多人吗?保护人体避免进一步伤害程序化细胞死亡骨质疏松症是癌症的特征由死细胞控制的某些形态学、生化和生理相继步骤骨质疏松症特征为细胞缩缩、四舍五入、核缩缩和核膜完整性丧失、等离子膜分解、核片分解和最后细胞分解等物理特征
光学细胞还经历一系列生化变换,包括执行器caspase激活、米松卓膜变换和释放一个蛋白质-细胞C、磷酸滴素外化-细胞表面、聚聚聚合素分片核
研究人员通过跟踪这些有序有序过程,可以观察抗癌药物处理对肿瘤细胞的偏差效果并有可能识别新药目标德博士和她的团队 都从这里展开研究
新光线下poptois
Avera癌症研究所团队使用荧光显微镜和三种荧光染色器,并用这三种相继生成的活细胞速率限制特征可见行尸3类(绿氟磷)的酶活动、红氟磷外部演示和变换卵巢癌细胞mitechondrial函数
团队单方或组合处理两条卵巢癌细胞线OVK18和A2780-使用抗癌药,即Paplitaxel(常规化疗药)和BMK120细胞荧光模式与未经处理细胞模式比较研究者通过显微镜检验发现,大多数未经处理的细胞荧光蓝色,因为他们的mithocordria仍然完好无损相形之下,处理细胞绿化和/或红化这是因为caspase3初始化和磷化素演示仅在potocis
电影#1:无穷控制MDA-MB468细胞三维投影片(重构Z段)显示72小时车机处理MDA-MB468机房中富含核Ki67(Yelow)和缺二维分片3Actin线条染红色MDA-MB468细胞双染Ki67(Yellow)和CleftdCaspase3(Green)单元格对Ki67和对CleftdCaspase3均负3Actin染为结构蛋白
电影#2:GDC-0980+ABT888+carboplatin-处理MDA-MB468细胞组合图像3D投影片显示72小时GDC-0980+ABT888+carboplatin处理MDA-MB468细胞中不存在核Ki67Actin线条染红色MDA-MB468细胞双染Ki67(Yellow)和CleftdCaspase3(Green)单元格对Ki67为负数,CleftdCaspase3为正数Actin染为结构蛋白
验证概念
研究者用不同剂量快车道或快车道和BMK120对卵巢癌细胞进行处理,并用不同放大度和时间点制作图象
不足为奇的是,快速处理OVK18细胞扩散下降或停止,视给定剂量而定,48小时后出现poticsis设置并同时表示potical标识与未经处理样本相比,这些样本总体死细胞数更多Paplicaxel和BMK120处理OVK18细胞也看到类似结果,四十四小时内出现potosis
Paclitaxel处理A2780细胞最长达偏差状态,处理过程在处理后48小时和72小时发生iochdrial活动变化24至48小时后处理样本中死细胞数比未经处理细胞数多,证明快车轴导致细胞死亡,从而验证显微镜结果使用此协议后,小组成功识别了时间和最终药效模式诱导aptosis
识别生死细胞
为了识别活细胞和死细胞,Dey博士和她的组用新套含氟磷处理样本死细胞变红而活细胞变绿线粒体潜力用流细胞计测量,而死细胞则用荧光显微镜阅读荧光成像比较使用“活死细胞检测”,显示红细胞和绿细胞没有重叠处理和未处理样本
相形之下,用他们的三光染色检测显示红色(附件五阳性apotictee)和绿色(主动caspase3正apotictee)在处理和未处理样本中重叠这是因为绿细胞和红细胞处于异步蓝红绿细胞之间没有重叠,预计这是因为主动米托昆卓亚蓝细胞不太可能出现吸附症,而红绿或红绿或红绿细胞都不太可能显示功能性蓝米松卓亚有趣的是,少数药处理细胞仍然显示米松卓活性(蓝荧光)。
为何重要
并非所有生物化学过程都与吸附症相关,而吸附事件依赖阶段、时间和刺激作用,而三敏性染色法的强度在于易用性及其同时染色三大临界形态学和生化非吸附性步骤的能力 — — 这使得精确识别吸附感与非吸附性细胞更容易得多。相比之下,大多数现有技术依赖一种偏差特征(不一定偏差特征)识别和量化这些细胞三光染色能实时显示活细胞偏差过程 — — 允许研究者看到抗癌药机制及其效果
方便实验室方法可用最小化实验室设备和资源实现标准化,使之成为相对廉价易用方法,可应用到任何相关药物处理中。值得注意的是,它已被使用观察不同药类组合对其他肿瘤细胞线的影响分析的强点在于它能以事件化方式识别亲反吸食药的手法
个人响应
为何部分细胞显示红蓝检验
现场死细胞检测显示成红绿死细胞解析中没有蓝色少数细胞很少显示处理条件下的红蓝染色, 因为在aptochodria初始阶段, itocordria仍然功能化(蓝色),这些都是真正稀有事件并依赖药物诱发aptosis文化条件中,所有细胞不都处于同级吸附症中,所有细胞相位不同步
未来研究你看到了什么
实验室友好性实战细胞中三光染色, 期望该方法会成为一种常用实验室工具研究癌症研究中的药效
协议目前已被验证并用于翻译肿瘤学,但我们认为该程序将有意义地改编到其他领域的apotosis研究中举例说,吸附症现象是开发生物、再生医学和干细胞研究领域的关键事件帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、心肌缺血症、心肌梗塞症和外伤诱发骨质疏松症研究将有机会有效使用此协议